项目背景

　　Annexin A1是一种钙离子依赖的膜联蛋白，主要在外周血细胞如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞等亚细胞颗粒中高度表达，在T淋巴细胞、肥大细胞和B细胞亚群中少量表达。Annexin A1通过细胞膜表面的G蛋白偶联受体（FPR1, FPR2）发挥功能，参与分化，凋亡、增殖和炎症等多种生理学过程。Annexin A1能够通过与细胞内的磷脂酶A2结合，并抑制其活性，从而阻断下游促炎分子激活，减轻炎症反应。内源性和外源性Annexin A1与中性粒细胞上的FPRs结合导致中性粒细胞滚动和粘附内皮细胞减少，粘附细胞分离增加，抑制中性粒细胞迁移。

　　NF-κB（nuclear factor-kappa B）是从B淋巴细胞的细胞核中提取的一类转录因子，与免疫球蛋白kappa轻链基因的增强子B序列GGGACTTTCC特异性结合，促进κ轻链基因表达。NF-κB调控的信号通路在细胞炎症反应、免疫应答等过程中起到关键作用。近来，研究表明NF-κB信号通路促进免疫检查点分子在肿瘤组织中的表达，但具体调控机制仍不清楚。Ampomah PB等发现Annexin A1能够通过激活ERK, Akt and NF-κB等信号通路促进巨噬细胞M2型极化。

　　在NSCLC中Annexin A1（ANXA1）与NF-κB及PD-1（PDCD1）表达成正相关，然而Annexin A1在肿瘤免疫逃逸中的作用仍不十分清楚，且Annexin A1是否通过激活NF-κB信号参与PD-1表达的调控机制仍需进一步研究。

　　项目内容

　　1. Annexin A1对NSCLC细胞生物学功能的影响

　　蛋白印迹、激光共聚焦显微镜检测Annexin A1在NSCLC细胞系中的表达；敲减或过表达Annexin A1，CCK-8、流式细胞仪、细胞侵袭检测NSCLC细胞增殖、凋亡及转移活性；流式细胞仪、激光共聚焦显微镜检测NSCLC细胞PD-L1表达。

　　2. Annexin A1对T细胞功能的影响

　　NSCLC细胞中，敲减或过表达Annexin A1。将NSCLC细胞与CD8+ T细胞共孵育，酶标仪检测CD8+ T细胞活性，流式细胞仪检测CD8+ T细胞PD-1表达及凋亡；应用Annexin A1单克隆抗体阻断Annexin A1，观察CD8+ T细胞活性，凋亡及PD-1表达。

　　3. Annexin A1对NF-κB信号通路及PD-1表达的调控

　　外源加入重组人Annexin A1蛋白，酶标仪检测CD8+ T细胞活性，流式细胞仪检测CD8+ T细胞PD-1表达及凋亡；蛋白印迹检测CD8+ T细胞NF-κB通路相关蛋白。抑制NF-κB通路相关蛋白，检测CD8+ T细胞PD-1表达。

　　4. Annexin A1调控NF-κB信号通路上调T细胞PD-1表达的动物实验

　　建立Annexin A1敲减或过表达稳转细胞系，构建移植瘤小鼠模型，收集瘤体，观察肿瘤质量/体积，脾脏及淋巴结体积；免疫组织化学、蛋白印迹检测NSCLC细胞PD-L1表达；流式细胞仪检测CD8+T细胞比例，凋亡率及PD-1表达；酶标仪检测血清Annexin A1，IL-10，TNF-a，IFN-γ等含量；蛋白印迹检测CD8+ T细胞NF-κB通路相关蛋白表达。

　　项目对象

　　肺腺癌细胞系（H1299，A549）和鳞癌细胞系（H226和H520）、裸鼠。

　　项目时间

　　自2021年1月至2023年12月

　　项目联系人

　　朱少敏 联系电话：15010624992