项目背景

　　卵巢癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，我国每年新发病例约5.5万例，每年死亡人数约3.7万例。即使初诊的卵巢癌患者接受了理想的肿瘤细胞减灭术及术后化疗，但仍有 70%～80%的卵巢癌患者会出现复发，几乎所有复发性卵巢癌患者最终都会产生铂耐药。目前针对铂耐药卵巢癌尚无首选治疗方案。

　　PARP 抑制剂通过抑制 PARP 酶的活性阻止 DNA单链损伤修复,可以导致更多的DNA双链损伤，在同源重组修复缺陷的细胞中无法进行DNA双链损伤的修复，进而造成肿瘤细胞凋亡。氟唑帕利属于新一代PARP抑制剂，3氟集团的加入使药代动力学特性得到很大改善。在体内实验中，氟唑帕利显示出很好的抗肿瘤作用。目前已经批准用于治疗既往经过二线及以上化疗的伴有BRCA1/2致病性或疑似致病性突变的复发性卵巢癌患者；铂敏感复发性上皮性卵巢癌、输卵管癌或原发性腹膜癌成人患者在含铂化疗达到完全缓解或部分缓解后的维持治疗。但铂耐药卵巢癌中单独使用PARP抑制剂仍然存在有效率低，PFS持续时间短的问题。寻找合适的药物进行联合治疗是目前的难点也将可能是突破点。氟唑帕利与阿帕替尼的联合可引起显著的抗肿瘤反应，而且没有额外的毒性。氟唑帕利联合阿帕替尼在铂耐药卵巢癌方向尚缺乏进一步研究。

　　抗血管生成抑制剂可以阻断血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及其受体介导的信号通路，改善肿瘤微环境，使已经存在的肿瘤血管退化，切断肿瘤细胞生长所需要的营养物质，从而抑制肿瘤生长。阿帕替尼具有高选择性地与肿瘤细胞内VEGF 的 ATP 结合位点竞争性结合，阻断向下游传递信号，抑制其自动磷酸化，使新生的肿瘤血管逐渐退化，从而阻止肿瘤新生血管形成，继而抑制肿瘤的生长、扩散或转移。在 AEROC研究中，35名铂耐药复发性卵巢癌患者接受了阿帕替尼和依托泊苷的口服联合治疗，有效率也明显增高。

　　抗血管生成抑制剂可以阻断VEGF及其受体介导的信号通路，改善肿瘤微环境，使已经存在的肿瘤血管退化，切断肿瘤细胞生长所需要的氧气和养分的供应，从而加重瘤内缺氧状态导致细胞死亡。PARP 抑制剂具有加剧瘤内缺氧的作用。因此，两者联合可产生协同效应。此外，jiechen 等通过体外加入 PARP 抑制剂，发现其能够直接抑制 VEGF-A 介导的 HUVEC 的增殖、迁移和血管生成能力，表明PARP1能通过诱导 VEGF-A的表达上调来促进血管生成。阿帕替尼可使细胞从转移能力较强的间质表型向转移能力较弱的上皮表型转化。因此，两种药物的联合使用，可以从机制上得到互补，从而增加抗肿瘤作用。

　　为了响应国家不断深入并提升医疗水平的精神。北京医学奖励基金会特设立“氟唑帕利联合阿帕替尼对铂耐药卵巢癌的协同抗肿瘤效应及其相关机制研究”项目。

　　项目内容

　　（1）两药联合在体外有协同抗肿瘤作用

　　针对铂耐药卵巢癌细胞株，检测细胞增殖/凋亡，形态学变化、侵袭能力的改变，两药联合在体外是否有协同抗肿瘤作用。检测协同抗肿瘤作用机制。

　　1、MTT法检测不同浓度药物及不同药物组别对SKOV3/DDP细胞增殖的影响；

　　2、流式细胞术检测联合用药对SKOV3/DDP细胞周期及凋亡的影响；

　　3、显微镜下观察不同药物组别对SKOV3/DDP细胞形态的影响；

　　4、细胞划痕试验检测联合用药对卵巢癌SKOV3/DDP细胞迁移能力的作用；

　　5、Transwell体外侵袭试验检测联合用药对SKOV3/DDP细胞侵袭能力的影响；

　　6、采用Western Blotting法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测经药物处理后SKOV3/DDP细胞中E-cadherin、vimentin的表达情况。

　　（2）两药联合在体内协同作用

　　根据体外实验结果，在裸鼠体内建立卵巢癌铂耐药动物模型。实验分为4组：氟唑帕利单药、阿帕替尼单药、氟唑帕利联合阿帕替尼、对照组。种植二周，待肿瘤体积达100mm3左右时开始第一次给予药物，每三天给药一次。用药后每日观察小鼠生活情况，每周两次测量种植瘤体积变化。用药八周后处死小鼠，剥离种植瘤，测量肿瘤大小（即肿瘤的体积，测量肿瘤的长和宽，并按下列公式计算：4π/3×(宽/2)×(长/2)）。将种植瘤组织进行石蜡包埋切片，应用免疫组化检测小鼠肿瘤组织中EMT的标志物；应用微血管密度（MVD）测定，免疫组化染色显示小鼠肿瘤内血管，采用抗CD31抗体标记血管内皮，判断肿瘤血管生成。空间代谢组学检测联合用药机制，将各组取得的肿瘤组织冰冻/切片，使用空气动力辅助离子化解吸电喷雾电离质谱成像（AFAI-MSI）技术。检测联合治疗组与单药组之间分子改变，通过通路富集结合生信分析，探索联合治疗对肿瘤微环境的改变及信号通路的影响。

　　项目对象

　　卵巢癌细胞、裸鼠。

　　项目时间

　　自2023年6月至2026年5月

　　项目联系人

　　贾志丽 联系电话：13146841199